水質(zhì)葉綠素a分光光度法的采集保存和測(cè)定

        我國(guó)測(cè)定葉綠素a的方法主要有分光光度法和熒光分光光度法，環(huán)境保護(hù)部發(fā)布的《HJ 897-2017 水質(zhì) 葉綠素a的測(cè)定 分光光度法》、水利部頒布的“水質(zhì)葉綠素的濃度測(cè)分光光度法(SL88-1994現(xiàn)已廢止被SL88-2012代替)及海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第7部分：近海污染生態(tài)調(diào)查和生物監(jiān)測(cè)GB17378.7-2007。其中SL88-1994與《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法》(第四版增補(bǔ)版)中“葉綠素a的測(cè)定方法”在樣品處理和計(jì)算公式都相同，屬干丙酮研磨萃取法。而SL88-2012與GB17378.7-2007在樣品處理和計(jì)算公式相同，屬于丙酮反復(fù)凍融-浸提法。

我們的采用了熒光檢測(cè)技術(shù)，該技術(shù)是利用浮游植物體內(nèi)的葉綠素受特定波長(zhǎng)的光激發(fā)后產(chǎn)生的熒光與其濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系的原理,因此通過(guò)檢測(cè)浮游植物中葉綠素a發(fā)出的熒光強(qiáng)度即可實(shí)現(xiàn)對(duì)浮游植物的定量測(cè)定。

水質(zhì)葉綠素a分光光度法的采集、保存和測(cè)定
1、樣品采集：樣品的采集一般使用有機(jī)玻璃采水器或其他適當(dāng)?shù)牟蓸悠鞑杉嫦?.5m樣品，湖泊、水庫(kù)根據(jù)需要可進(jìn)行分層采樣或混合采樣，采樣體積為1L或500ml。如果樣品中含沉降性固體( 如泥沙等), 應(yīng)將樣品搖勻后倒入2L量筒，避光靜置30min,取水面下5cm樣品，轉(zhuǎn)移至采樣瓶。在每升樣品中加入1ml碳酸鎂懸濁液， 以防止酸化引起色素溶解。
注:如果水深不足0.5m.在水深1/2處采集樣品，但不得混入水面漂浮物。
2、樣品保存：樣品采集后應(yīng)在0C~4C避光保存、運(yùn)輸，24h內(nèi)運(yùn)送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室過(guò)濾(若樣品24h內(nèi)不能送達(dá)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)現(xiàn)場(chǎng)過(guò)濾，濾膜避光冷凍運(yùn)輸)，樣品濾膜于-20C避光保存，14d內(nèi)分析完畢。
注:樣品采集后，如條件允許，宜盡快分析完畢。
3、樣品測(cè)定：將一定量樣品用濾膜過(guò)濾截留藻類，研磨破碎藻類細(xì)胞，用丙酮提取葉綠素，離心后于特定波長(zhǎng)下測(cè)定提取液吸光度，根據(jù)公式計(jì)算水中葉綠素a濃度。